Lucky Luke es un vaquero de piernas arqueadas y dientes de caballo que dispara más rápido que su sombra y que conoce todos los trucos de los indios más experimentados. Pistolero y jinete consumado de nervios de hielo, pone sus cualidades al servicio de la justicia y está siempre dispuesto a socorrer al débil y a encender el valor de los pusilánimes. Termina todas sus aventuras alejándose hacia el horizonte mientras canta una canción de la que sólo conocemos su estribillo: «I´m a poor lonesome cow-boy and a long way from home…» (traducido como «soy un pobre vaquero solitario y la ancha pradera es mi hogar»).
Su habilidosa yegua Jolly Jumper, cuyos pensamientos dan la réplica a los comentarios de Luke, es capaz de jugar al ajedrez con él (El 7º de caballería), conoce tan bien las costumbres de su dueño que coloca un caballo en cada ventana para facilitarle la huida si es necesario (El emperador Smith), y deja estupefactos a los demás caballos cuando ven que silba para llamar a su dueño (Western Circus).
A lo largo de muchos álbumes aparecen como enemigos los estúpidos hermanos Dalton: Joe, el más pequeño y mandón, Jack y William, y Averell, el más alto y simplón. Por procedimientos muy distintos abandonan el penal una y otra vez, y Luke los encierra una y otra vez.
Desempeña un papel estelar en varios álbumes Ran Tan Plan, imitación sarcástica de Rin Tin Tin (un listísimo perro que protagonizó una de las series de televisión más famosas de los años 50 y 60). Ran Tan Plan sólo acierta por casualidad, no sigue los rastros sino que huye de ellos, y no sabe dar la pata pero sí meterla.
Además de los protagonistas de determinadas aventuras, Goscinny y Morris van haciendo desfilar por sus historias numerosos personajes-tipo. Algunos ocupan papeles más o menos largos: el enterrador, el truhán, el predicador, el viejo buscador de oro, el fotógrafo, el telegrafista novato, la dueña del saloon. Otros son sólo guiños a situaciones típicas, como el niño que corre a dar un mensaje, o a personajes históricos como Lincoln o Twain.